期刊简介
本刊运用现代医学揭示肿瘤发病规律，进行学术交流、沟通信息，促进肿瘤防治工作的发展，鼓励从事肿瘤研究与临床的工作者勇于开拓、创新，为人民健康事业做贡献！
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首页>实用肿瘤学杂志
- 杂志名称：实用肿瘤学杂志
- 主管单位：哈尔滨医科大学
- 主办单位：黑龙江省肿瘤医院
- 国际刊号：1002-3070
- 国内刊号：23-1212/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：黑龙江省第七届期刊优秀文章编辑暨第四届期刊装帧设计奖评选活动中荣获一等奖一项、二等奖两项期刊收录：知网收录(中), 上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, 维普收录(中), 万方收录(中), CA 化学文摘(美)
组蛋白赖氨酸转移酶KAT6 B基因shRNA慢病毒载体的构建与鉴定
靳俊杰；安静；曹涤非；宋爱利；赵丽丽；刘兆良
关键词：载体构建, 基因沉默, RNA干扰, KAT6B, 慢病毒载体
摘要：目的 在乳腺癌细胞T47D中利用构建的短发卡RNA(shRNA)慢病毒载体对赖氨酸乙酰转移酶6B(KAT6B/MORF)基因进行RNA干扰,通过下调该基因的表达来研究其对乳腺癌细胞的抑制功能.方法 针对KAT6B基因的CDS区合成2对单链的短发卡RNA(shRNA5、shRNA8)及相应的对照组序列(Scramble5、Scramble8),通过聚合酶链式反应(PCR)扩增后,与双酶切(EcoRl、Xhol)线性化处理的入门载体(pENTR/pSM2(CMV)GFP)同源重组,获得含有目的片段的入门克隆.再通过Gateway系统的LR克隆反应,将目的片段重组到目的载体(pLenti x1 puro DEST)上.利用慢病毒包装系统,将慢病毒包装质粒分别与构建好的两对目的质粒共转染到HEK-293T细胞中,收集病毒上清,转导乳腺癌细胞T47D.后,通过免疫印迹法(Western blot)检测KAT6B的表达.结果 对转化获得的单菌落进行测序鉴定,与目标序列完全一致,表明已经成功构建慢病毒载体.Western blot结果显示KAT6B基因的蛋白表达量在每组shRNA中都比相应的对照组显著降低,表明构建的基因沉默载体在乳腺癌细胞T47D中对KAT6B基因具有基因沉默作用.结论 本研究通过构建KAT6B基因的shR-NA慢病毒基因沉默载体,在乳腺癌细胞T47D中对KAT6B基因进行RNA干扰的研究,为进一步研究KAT6B基因在乳腺癌中发挥肿瘤抑制作用奠定了基础.
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